Сорбенты для препаративной хроматографии
Описание
Выбор стратегии очистки целевого белка
Результаты очистки белка традиционно описывается с точки зрения чистоты, однородности и выхода. Часто оптимизация одного из выходных параметров может быть достигнута только за счет других выходных параметров, и выбор стратегии очистки целевого продукта всегда является компромиссом.
Чистота: Измеряется с помощью электрофореза в виде отношения целевого белка к общему белку.
Однородность: Измеряется эксклюзионной хроматографией в виде содержания мономера в агрегате.
Выход: Измеряется по поглощению при 280 нм и с использованием коэффициента экстинкции для целевого белка.
Каждый хроматографический процесс можно разделить на несколько фаз, таких как загрузка образца, промывка и элюирование. Каждая фаза может включать различные факторы (такие как pH, электропроводность, добавки и скорость потока), и все они могут оказывать сильное влияние на результат очистки.
Хроматографические методы и выбор сорбента для очистки белка
Хроматографические методы разделяются в соответствии с различиями между свойствами очищаемого белка (целевого белка) и свойствами других веществ в образце. Эффективность очистки сильно зависит от хроматографического сорбента, выбранного для каждого метода. Общий принцип выбора хроматографических сорбентов заключается в большем размере гранул для ранних стадий очистки и меньшем размере гранул для более поздних стадий, где требования к чистоте повышены.
Сорбенты для аффинной хроматографии
Афинная хроматография позволяет разделять белки на основе двустороннего взаимодействия между целевым белком (или группой белков) и лигандом, прикрепленным к хроматографической матрице. Афинная хроматография отделяет молекулы на основе биологического распознавания, в т. ч. различные меченые рекомбинантные белки, в частности гистидин, глутатион-S-трансфераза (ГСТ), Strep-tag™ II и мальтозо-связывающий белок а также различные среды для очистки антител. Афинная хроматография предоставляет высокую избирательность, высокое разрешение и емкость на уровне выше средней.
Примеры аффинных сорбентов: Poros, Capture Select, Nuvia IMAC, MabSelect PrismA, MabSelect Sure, Capto Blue
Сорбенты для гель-хроматографии
Гель-хроматография (SEC или гельфильтрация) позволяет проводить разделение веществ с различным размером молекул. SEC можно использовать для очистки белков (фракционирование) или для группового разделения, при котором образцы подразделяются на две большие группы.
Примеры гель-фильтрующих сорбентов: Sephacryl, Sephadex,
Сорбенты для ионообменной хроматографии
Ионообменная хроматография позволяет разделять белки с различным поверхностным зарядом, что обеспечивает разделение с высоким разрешением и позволяет наносить большие объемы образцов. Разделение основано на двустороннем взаиможействии между заряженным белком и противоположно заряженной матрицей.
Примеры ионообменных сорбентов: Poros AEX, Nuvia Q, Nuvia S, UNOsphere S, Capto Q ImpRes, Capto Q, Capto S
Сорбенты для мультимодальной хроматографии
Мультимодальная хроматография осуществляется с помощью мультимодальных сорбентов, например, Capto Adhere и Capto MMC, которые специально разработаны для получения нестандартной селективности. Заряженный лиганды дополняются дополнительными функциональными группами, которые привносят дополнительное взаимодействие (комбинация водородного, гидрофобного и ванн-дер-ваальсова взаимодействия).
Примеры сорбентов для мультимодальной хроматографии: Capto Core 400, Capto Core 700, Capto MMC, Capto Adhere
Сорбенты для гидрофобной хроматографии
Хроматография с гидрофобным взаимодействием разделяет белки с различными гидрофобными свойствами. Разделение основано на двустороннем взаимодействии между белком и гидрофобной поверхностью хроматографической матрицы.
Примеры гидрофобных сорбентов: Poros HIC, Macro-Prep HIC, Butyl Sepharose, Capto Butyl ImpRes
